Онкологические заболевания, к сожалению, становятся все более распространенными среди домашних животных. Цитология предоставляет ветеринарным врачам быстрый, недорогой и минимально инвазивный способ получения информации о клеточном составе тканей и органов. В контексте онкологии она не только подтверждает опухолевой процесс, но и определяет тип опухоли, степень её злокачественности и может даже прогнозировать ответ на лечение.
Основы цитологии и методы забора материала
Цитология – это наука, изучающая строение, функции и патологии клеток. В ветеринарии цитологические исследования применяются для диагностики многих заболеваний, включая инфекционные, воспалительные и неопластические процессы.
Методы забора цитологического материала
Существует несколько методов получения цитологического материала, выбор которого зависит от локализации поражения, предполагаемого диагноза и общего состояния животного.
- Тонкоигольная аспирационная биопсия (ТАБ). Применяется чаще других методик. Метод позволяет получить клетки из подкожных новообразований, лимфатических узлов, внутренних органов и других доступных тканей. Процедура выполняется шприцом и тонкой иглой (обычно 22-25G). Игла вводится в пораженную ткань, создается отрицательное давление в шприце, и несколько раз выполняется пункция в разных направлениях. Полученный материал выдувается на предметное стекло для приготовления мазка.
- Соскоб. Метод применяется для диагностики кожных поражений и новообразований. С помощью скальпеля или шпателя с поверхности поражения соскабливаются клетки, которые затем наносятся на предметное стекло.
- Отпечаток. Метод заключается в прикладывании предметного стекла к поверхности поражения (например, к поверхности свежего разреза опухоли). Клетки, прилипшие к стеклу, фиксируются и окрашиваются.
- Смыв. Метод получения клеток из полостей тела (например, плевральной, брюшной или синовиальной жидкости). Жидкость аспирируется с помощью шприца и иглы, центрифугируется для осаждения клеток, из осадка делают мазок.
- Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). Применяется для диагностики заболеваний легких. В трахею вводится катетер, через который в легкие вводят стерильный физиологический раствор. Жидкость аспирируется обратно и используется для мазка.
- Вагинальный мазок. Забор материала для определения стадии полового цикла у самок и для диагностики инфекций половых путей.
- Смыв с роговицы. Используется для диагностики заболеваний роговицы, в частности, для выявления вируса герпеса кошек.
Подготовка цитологических препаратов
Правильная подготовка препаратов важна для качества и информативности результатов:
- Фиксация. Сразу после приготовления мазка необходимо зафиксировать клетки. Наиболее распространенным фиксатором является 95% этиловый спирт. Мазок погружается в спирт на 5-10 минут. Фиксация предотвращает аутолиз клеток и сохраняет их морфологию. Альтернативные фиксаторы, такие как формалин, используются реже, так как они могут влиять на качество окраски.
- Окраска. После фиксации мазки окрашиваются. Чаще применяется окраска по Романовскому-Гимзе. Этот метод позволяет дифференцировать различные типы клеток и выявлять морфологические особенности клеточных структур. Альтернативные методы окраски, например, по Папаниколау, используются реже, в основном для исследования вагинальных мазков и смывов с полостей тела.
- Монтаж. После окраски мазок промывается, высушивается и заключается под покровное стекло с использованием специальной среды (например, Entellan). Это позволяет сохранить препарат на длительное время и защитить его от повреждений.
Цитологическая диагностика
Цитологическое исследование - важный инструмент в диагностике неоплазий у животных. Оно позволяет не только подтвердить наличие опухолевого процесса, но и определить тип опухоли и степень её злокачественности.
Цитологические признаки злокачественности:
При цитологическом исследовании опухолевых клеток выявляют ряд признаков, свидетельствующих о злокачественном характере процесса:
- Анизоцитоз: различие в размерах клеток.
- Анизокариоз: различие в размерах ядер клеток.
- Плеоморфизм: различие в форме клеток и ядер.
- Гиперхромазия: усиленная окраска ядер, свидетельствующая о повышенной активности ДНК.
- Увеличенное ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО): отношение размера ядра к размеру цитоплазмы увеличено.
- Множественные ядрышки: наличие нескольких ядрышек в ядре клетки.
- Ядрышки неправильной формы: неправильная форма ядрышек.
- Грубый хроматин: неравномерное распределение хроматина в ядре.
- Митозы: наличие клеток в стадии митоза, особенно атипичных митозов.
- Макронуклеоли: очень крупные ядрышки.
- Многоядерные клетки: наличие клеток с несколькими ядрами.
Наличие одного или нескольких признаков злокачественности не всегда является однозначным подтверждением рака. Необходимо учитывать комплекс морфологических характеристик клеток, а также клинические данные и результаты других исследований.
Диагностика типов опухолей
Цитология позволяет диагностировать широкий спектр неоплазий у животных:
- Эпителиальные (карциномы). Плотно расположенные клетки с четкими границами. Они часто имеют признаки злокачественности, такие как анизоцитоз, анизокариоз, гиперхромазия и увеличение ЯЦО. Примеры: аденокарцинома, плоскоклеточный рак.
- Мезенхимальные (саркомы). Веретенообразные или округлые клетки, расположенные обособленно или в небольших группах. Цитоплазма обычно обильная и эозинофильная. Признаки злокачественности могут быть менее выражены, чем в карциномах. Примеры: фибросаркома, остеосаркома, гемангиосаркома.
- Круглоклеточные. Небольшие, округлые клетки с высоким ЯЦО. К этой группе относятся лимфомы, мастоцитомы, гистиоцитомы, плазмоцитомы и трансмиссивная венерическая саркома.
- Смешанные опухоли. Содержат элементы разных типов тканей. Примеры: смешанные опухоли молочной железы у собак.
- Меланомы. Клетки, содержащие меланин – пигмент, придающий им коричневый или черный цвет.
Ограничения цитологической диагностики
Несмотря на высокую информативность, цитология имеет свои ограничения:
- Не всегда позволяет определить точный тип неоплазии. Это часто происходит при плохо дифференцированных опухолях, цитологического исследования недостаточно для определения точного гистологического типа. Требуется проведение гистологического исследования (биопсии).
- Может давать ложноотрицательные результаты. Если материал для был взят неправильно или если новообразование маленькое, то результат может быть ложноотрицательным.
- Не всегда можно оценить степень злокачественности. Цитологические признаки не всегда коррелируют со степенью злокачественности. Для оценки степени требуется проведение гистологического исследования.
Роль цитологии в планировании и мониторинге лечения онкологических пациентов
Цитологическое исследование играет важную роль не только в диагностике опухолей, но и в планировании и мониторинге лечения животных.
Определение тактики
Например, при диагностике мастоцитомы, цитологическое исследование позволяет определить степень дифференцировки опухоли, что важно для определения хирургического или химиотерапевтического лечения. При диагностике лимфомы, цитологическое исследование может помочь определить подтип лимфомы, что также влияет на выбор протокола химиотерапии.
Мониторинг эффективности
Например, после хирургического удаления опухоли, цитологическое исследование лимфатических узлов может помочь выявить метастазы. Во время химиотерапии, цитологическое исследование костного мозга может помочь оценить его состояние и выявить миелосупрессию. Цитологическое исследование может также использоваться для оценки ответа опухоли на лечение.
Оценка рецидива опухоли
Если после лечения у животного появляются новые новообразования, то исследование помогает определить, являются ли они метастазами первичной неоплазмы или новыми новообразованиями. Исследование также важно в диагностике метастатического поражения лимфатических узлов и внутренних органов.
Новые направления в цитологии
Жидкостная цитология
Это метод, при котором клетки из биологического материала помещаются в специальную жидкость, которая позволяет сохранить их структуру и улучшить качество препаратов. Он имеет много плюсов перед традиционной цитологией, таких как более высокая чувствительность и специфичность, а также возможность проведения дополнительных исследований, таких как иммуноцитохимия и молекулярно-генетические анализы.
Иммуноцитохимия
Метод позволяет идентифицировать определенные белки в клетках с помощью антител. Иммуноцитохимия может использоваться для дифференциальной диагностики опухолей, определения прогноза и выбора тактики лечения.
Молекулярно-генетические анализы
Метод позволяет выявлять мутации в генах опухолевых клеток. Эта информация может использоваться для определения прогноза и выбора таргетной терапии.
Заключение
Цитология - важный инструмент в ветеринарной онкологии. Она позволяет быстро, относительно недорого и минимально инвазивно получить информацию о клеточном составе тканей и органов. Цитологическое исследование используется для диагностики неоплазий, определения их типа и степени злокачественности, а также для планирования и мониторинга лечения онкологических пациентов.
Новые направления исследований, такие как жидкостная цитология, иммуноцитохимия и молекулярно-генетические анализы, позволяют повысить чувствительность и специфичность диагностики опухолей и разработать новые методы лечения. Несмотря на ограничения, цитология остается незаменимым методом диагностики в ветеринарной практике и играет важную роль в улучшении качества жизни онкологических пациентов.
Для максимальной информативности и точности диагностики необходимо соблюдать строгие правила сбора и подготовки цитологических препаратов, а также учитывать клинические данные и результаты других исследований. Комплексный подход к диагностике и лечению неоплазий позволяет улучшить прогноз и продлить жизнь наших четвероногих пациентов.
